[mouse work] proteinase_K_만들기

[Seung Jae Jeong]

I. proteinase K만들기.

 

	stock	working	100ml
Tris-HCl(pH 7.5)	1M	10mM	1ml
CaCl2	1M	20mM	2ml
Glycerol		50%	50ml
0.22㎛ filtered D.W			47ml

♧ Glycerol treatment 주위 (정확한 양 넣어줄 것.)

 

▶이 100ml solution에 total 1g의 PK를 녹여준다.

⇒10mg/ml의 stock이 만들어짐.

 

II. TES 만들기

  ▶ 약 1cm정도로 자른 꼬리에 TES 500㎕ + PK20㎕(=100~200㎍/1cm tail)

      처리한 후 58^OC에서 O/N

♧.Water bath는 58^OC로 미리 setting 해놓는다.

PK를60^OC 이상으로 처리할 경우,PK가 파괴되므로 절대 넘지 않도록 주의.

♧ PK는 녹여서 잘 inverting해준 후에 사용한다.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

II. TES 만들기.

 

	Stock	Working	40ml
Tris-HCl (pH8.0)	1M	0.05M	2ml
EDTA (pH8.0)	0.5M	0.05M	4ml
SDS	10%	0.5%	2ml
D.W			32ml

 

 

 

 

 

 

 

 

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