The isolation of mouse genomic DNA 2

1.      꼬리가 든 E.tub에 500μl TES, 20μl P.K(proteinase K, =20mg/ml)

2.      55⁰ C의 water bath에서 4시간 이상 반응 시킨다.(O/N 반응도 OK.)

3.      꼬리가 완전히 녹으면 뼈와 털만이 남게된다.

4.      PCIA(phenol:CIA=1:1)를 500㎕넣고 15분간(5분도 OK) inverting. 이때 너무 세게 흔들지 않도록 주의한다.

5.      14,000rpm에서 10분간 centrifugation.

6.      blue tip 끝을 0.3cm 정도 잘라 낸 것으로 상층액을 350㎕ 따서 새 E.tube로 옮긴다.

7.      8M ammonium acetate,150㎕를 넣는다.

8.      7번의 E.tube에 100%  ethanol 800㎕를 넣고 15~20회 정도 뒤집으며 섞어준 후, 상온에서 30분간 둔다.

9.      14,000rpm에서 10분간 원심분리. 이때 tube 바닥에 pellet이 보여야 한다.

10.  pellet을 건들이지 않게 조심하며 에탄올 제거.

11.  70% 에탄올 500㎕를 넣고 바로 14,000rpm에서 5분간 centrifuge함.

12.  공기 중에서 tube 뚜껑을 열어 놓은 채로 pellet을 말린다.

13.  D.W 200㎕에 DNA pellet을 말린다.