[molecular biology work] Production_of_antibody

Production of antibody

1.   먼저 1kg 의 토끼 2마리(male)를 구입하여 약 3-7일간 안정시킨 후 ear vein에서 pre-immuneserum을 약 200ul 취하여 western 을 통해 이 토끼가 병력이 있는 놈인지 혹은 자가면역 질환을 가지고 있는 지 확인한다.

2.   3일 후 토끼 1마리당 antigen(1mg/ml) 500ul와 complete adjuvant 500ul(Sigma)를 syringe linker를 이용하여 잘 섞는다.

3.   섞은 다음 토끼의 등에 약 2-3회 피하지방에 주사한다.

4.   일주일 후 토끼 1 마리당 antigen(1mg/ml) 500ul와 incomplete adjuvant 500ul(Sigma)를 syringe linker를 이용하여 잘 섞은 다음 토끼의 등에 약 2-3회 피하지방에 주사한다.

5.   일주일 간격으로 4번과 같이 한번을 더 injection 한 다음 3일 후 ear vein에서 피를 뽑아 serum을 취하여 western을 통해 antibody가 만들어 졌는지 확인한다.

6.   Antibody 가 만들어졌으면 4일 후 마지막으로 4번과정과 같이 한번더 injection 한 다음 3일 후 cardiac puncture 혹은 목의 경동맥으로부터 피를 뽑아 4degree에서 4시간 동안 방치한 후 12,000Xg 에서 원심분리하여 serum만을 취한다. 다시 4 degree에서 overnight 방치하여 다시 12,000Xg 에서 원심분리하여 serum 을 취하여 –70 degree 에 1ml 혹은 5ml씩 분주하여 보관한다.